Mitbbs水平挺高的，纯从科学家角度质疑韩春雨

http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/32071349.html

发信人: mitbbs (未名空间), 信区: Biology
标  题: Mitbbs水平挺高的，纯从科学家角度质疑韩春雨
发信站: BBS 未名空间站 (Sun May 21 23:40:17 2017, 美东)


    2016年5月2日，英国《自然》杂志子刊《自然 生物技术》刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文，论文负责人的英文署名是"Chunyu Han"，这篇论文在华人生物界获得广泛赞誉。论文发表的第二天，韩春雨的名字和论文在一个名为"生物艺术全球生物医学交流"的微信群里得到了热烈讨论。生命体从受精卵开始，经过不断分裂，可分化出大约60兆亿个构建人类身体的细胞，每个细胞都含有全部生命遗传信息的基因组，所谓基因组编辑技术，就是人为来调整、改变、插入、去除、修改个体或物种的基因组序列。

http://tv.cctv.com/2017/05/20/VIDEBZRf7rQNg2Y1ExpBhpQM170520.shtml
一、学界和媒体的热议Mitbbs.com

    一年前，英国《自然生物技术》杂志刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文。论文的负责人"一鸣惊人"，得到了学界和媒体给予的无限荣光。在《自然》杂志社的所属期刊上发表论文，通常表明，该科研成果走在了世界科学研究的最前沿，并有可能对未来科学的发展起到关键性作用。此消息一经媒体爆出，在站内引起站内相关专业人士的热议。



国内科研水平不得了了，河北科技大学在Nature Biotechnoligy发表重要成果
http://mitbbs.com/article_t/Faculty/31803583.html

感觉韩春雨做科研的境界比颜宁高
http://mitbbs.com/article_t/Biology/32019973.html

二、实验结果被质疑

    1.一般来说Ago蛋白C端加tag，无论是来自于那个物种，蛋白就没有活性了，主要由Ago蛋白自身结构folding决定。文中用的几个construct，好像只有1-2个C端是没有tag的。那么，用C端带tag的Ago作出的实验，是否有意义呢？当然，不能够排除NgAgo本身特殊，能够tolerate C端tag，只是从预测的结构上讲，可能性很小。

    2.Ago催化酶切的核心domain实际是一个RNaseH fold，催化cleavage时应该结合双链（无论DNA或RNA），而双链其中一个是guide，另外一个是target。我无法想象gDNAguided NgAgo是如何切割双链DNA的。文章开始用2个guide，也许还有些道理（说不定细胞DNA会有瞬时的单链状态）；后来直接上一个guide也能行，确实比较神奇。当然，不能够排除NgAgo本身特殊，就是能够切双链，只是从其类似蛋白结构上讲，可能性很小。

    3.文章说如果同时转入Ago表达质粒和gDNA，就能行。如果先转Ago质粒，8小时候再转gDNA，就不行。这里我无法理解。难道先转Ago质粒8小时候，这个质粒就不表达了？如果继续表达，那8小时候再加gDNA跟同时一起转细胞又有什么区别呢？难道transfection效率太低，以至于2次transfect的东西无法进入同一细胞，因而不行？至少从这个角度来讲，文章的一个主要figure的结果有点奇怪。

    4. Minor points:文章用bacteria codon 的construct在真核细胞表达蛋白，能有表达真心不容易。如果用humanized codon，效果岂不更好？文末作者declare nofinancial interest，如果这个东西将来有大用途了，还不能有专利呀，太失策了。

纯从science角度分析一下韩春雨的文章
http://mitbbs.com/article_t/Biology/32021669.html

韩春雨的NgAgo效率怎么样？有人试过么?
http://mitbbs.com/article_t/Biology/32022589.html

韩春雨的NgAgo版上同志们进展如何
http://mitbbs.com/article_t/Biology/32025033.html

方舟子:韩春雨"诺贝尔奖级"实验的重复性问题. 附韩答复
http://mitbbs.com/article_t/Biology/32026229.html

Ng-Ago 重复进展（集合贴）
http://mitbbs.com/article_t/Biology/32025503.html

三、重复证明结果

    一位朋友最近在和韩老师交流，他只上国内虎扑不上MITBBS，所以我征得他同意发到这里，希望对正在重复这个实验的各位有所帮助。
for 24 well plate, 300ng NgAgo expression plasmid, 30-40ng GFP-N1, 200-500ng 5'P ssDNA guide